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本试剂盒采用高效的基因工程优化的逆转录酶，可大幅提升miRNA RT反应的效率。特别设计的茎环引物能够特异性地互补结合目的miRNA，通过RT反应获得加长的miRNA cDNA，该加长cDNA不仅可用于染料法qPCR，还可用于探针法qPCR，后续检测非常方便。DIOG miRNA茎环法逆转录试剂盒可与百奥莱博DIOG miRNA茎环染料法荧光定量PCR试剂盒(货号：ME0016)配套使用。

• 高效的基因工程优化的逆转录酶，可大幅提升miRNA RT反应的效率；
  
• 特别设计的茎环引物能够特异性地反转录目的miRNA，获得加长的miRNA cDNA，不仅可用于染料法qPCR，也可用于探针法qPCR。

• 用于RT反应的器具和水应进行RNase灭活处理，操作人员应佩戴口罩、手套等，以防RNase污染。
  
• 模板RNA使用量：Total RNA可在10pg～1μg之间。
  
• 试剂配制过程建议在碎冰上进行，DIOG RTase Mix粘度较大，应缓慢吸取，Tip头不要插入液体太深，以免粘染太多酶液。

• RT反应液配制：
  
  • 取RNase-free离心管，配制如下混合液：
    

    成分	用量
    DIOG RTase Mix	2μL
    2×RT Buffer	10μL
    Stem-loop primer（2μM）	1μL
    Total RNA	10pg～1μg
    RNase-free ddH2O	至20μL

  • 轻轻混匀，5000rpm离心5s。
• cDNA合成反应：
  

  温度	时间
  25℃	5min
  50℃	15min
  85℃	5min

  
  
• 反应完毕后，5000rpm离心5s，尽快放于冰上，直接进行PCR反应，如暂时不用，请放置于-20℃以下温度，在半年内使用完毕，不要反复冻融。